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膜性肾病（MN）是成人原发性肾病综合征最常见的病理类型之一，以大量蛋白尿、低白蛋白血症、肾小球基底膜（GBM）弥漫性增厚及上皮下免疫复合物沉积为核心特征。近十年流行病学数据显示，MN占所有肾小球疾病的比例已超过10%，且仍以每年13%的速度攀升，给社会与家庭带来沉重经济负担。足细胞作为肾小球滤过屏障的“终极守门人”，其结构或功能的微小缺损即可导致选择性滤过障碍，是蛋白尿发生的关键环节。然而，足细胞损伤的分子触发点尚未完全阐明，临床干预手段亦显匮乏：糖皮质激素、钙调磷酸酶抑制剂及利妥昔单抗虽可部分缓解免疫沉积，但起效慢、耐药率高、感染及代谢副作用突出，亟需开辟安全持久的新策略。传统中医认为MN属“水肿”“尿浊”范畴，病机以“气虚失运、瘀血阻络、湿浊内蕴”为主，治当益气活血、利湿泄浊。 三七祛湿方（Sanqi Qushi Formula，SQQS）由黄芪、莪术、三七、赤芍、土茯苓、白术、蝉花七味药材组成，在广东中医药大学第二临床医学院使用逾十年，临床回顾性统计显示其可显著提高早期MN缓解率且不良反应极低。遗憾的是，该复方“多成分-多靶点-多通路”的分子面貌始终模糊，成为制约其循证推广的最大瓶颈。 近日，Phytomedicine 在线发表了广州中医药大学联合东莞中医中药重点实验室完成的一项系统研究，首次整合UPLC-Q-Exactive-MS、网络药理学、RNA-seq转录组学、分子对接-动力学模拟-表面等离子共振（SPR）及体内外实验验证，阐明SQQS通过“JNK/FoxO1/GPX4”轴抑制足细胞铁死亡从而减轻MN肾损伤的全新机制，为中医现代化与精准用药提供了范式级证据。 中药复方疗效重现的前提是化学指纹可测、批次间差异可控。研究团队建立76分钟梯度洗脱HPLC-DAD指纹图谱，以落新妇苷（astilbin）为参照峰，对10批SQQS冻干粉进行相似度评价，结果显示相似度0.978–0.998；精密度、重复性、稳定性试验中，各共有峰相对保留时间与相对峰面积的RSD均＜6%，7个可鉴识成分（astilbin、paeoniflorin、baicalein、ginsenoside Rb1等）线性相关系数r²＞0.99，表明方法学可靠，可确保后续体内外实验及临床前放大生产的质量一致性。
被动Heymann肾炎（PHN）模型因其免疫沉积路径、基底膜增厚形态及蛋白尿表型与人类MN高度相似，被公认为评价MN干预策略的金标准。实验采用雄性SD大鼠，设正常对照、模型、FK-506阳性对照及SQQS低（5.3 g/kg）、中（10.6 g/kg）、高（21.2 g/kg）剂量组，造模同时灌胃给药4周。结果显示，SQQS呈剂量依赖性降低24 h尿蛋白，高剂量组第28天尿蛋白下降约65%，血清白蛋白显著回升，Scr、BUN、总胆固醇同步下调；组织学层面，HE、PASM与Masson染色提示GBM增厚、钉突形成、肾小管蛋白管型及胶原沉积均获明显改善；电镜下可见SQQS显著缓解足突广泛融合与上皮下电子致密物沉积。免疫荧光进一步揭示，SQQS高剂量组肾小球IgG与补体C3荧光强度较模型组下降约60%，提示其兼顾“控制自身抗体生成-抑制补体级联”双重环节，与FK-506疗效相当但无高血糖、感染等副作用。足细胞骨架相关蛋白synaptopodin、nephrin、WT-1、α-actinin-4的丢失是MN蛋白尿的分子标志，而desmin的异常表达则提示足细胞应激损伤。Western blot与免疫组化共同证实，模型组上述正向标记显著下调，desmin大幅上调；SQQS干预后，synaptopodin等指标恢复至接近正常水平，desmin表达被抑制70%以上。透射电镜显示，SQQS逆转了足细胞线粒体肿胀、嵴断裂等超微结构损害，从形态与功能双重层面证实其对足细胞的直接保护效应。铁死亡（ferroptosis）是一种铁依赖、脂质过氧化驱动的程序性细胞死亡，近年被视为足细胞耗竭的新凶手。研究首先观察线粒体体积缩小、嵴消失等典型铁死亡形态，随后检测肾组织丙二醛（MDA）升高、还原型谷胱甘肽（GSH）与超氧化物歧化酶（SOD）下降，以及普鲁士蓝染色示铁沉积显著增加；蛋白层面，关键抑制因子GPX4与膜胱氨酸转运体xCT明显下调，促铁死亡酶ACSL4上调。SQQS则呈剂量依赖地纠正上述异常：高剂量组MDA下降46%，GSH与SOD恢复近90%，GPX4与xCT表达提升2–3倍，铁沉积减少约一半，首次直接证实SQQS可阻断MN肾组织铁死亡进程。为明确“物质基础”，研究利用UPLC-Q-Exactive-MS对冻干粉与含药血清同步解析。负离子与正离子模式下，共从冻干粉指认或初步表征248种化学成分，包括黄酮68个、倍半萜57个、三萜皂苷52个、有机酸46个等；其中21个经对照品确证，包括来自黄芪的calycosin、来自赤芍的paeoniflorin、来自三七的ginsenoside Rb1/Rg1、来自土茯苓的astilbin等。进一步检测口服后血浆，共发现105个原型或代谢产物，其中41个为“体内-体外共存”的潜在活性分子，为后续网络药理学与实验验证奠定可操作的化学空间。
研究从FerrDb与GEO数据库整合164个MN-铁死亡交叉差异基因（FRDEGs），以41个体内暴露成分为探针，通过SwissTargetPrediction、BATMAN-TCM、DrugBank等多平台预测758个潜在靶点；Venn交集获得45个共同靶点，PPI网络拓扑分析提示TP53、EGFR、MAPK1（JNK2）、MAPK8（JNK1）、PARP1等为核心节点。GO/KEGG富集显示，SQQS主要干预“氧化应激-铁死亡-FoxO信号通路-鞘脂代谢”等通路，其中JNK/FoxO1轴高居信号网络中心，提示其可能是SQQS拮抗MN的关键分子开关。SQQS通过调控JNK/FoxO1/GPX4信号通路抑制PHN大鼠的铁死亡 研究者进一步对正常、模型及SQQS高剂量组肾皮质进行RNA-seq。差异表达基因（DEGs）分析显示，SQQS可回调约78%的MN异常表达基因，GO生物过程聚焦“血管形态发生-细菌防御反应-激酶活性调节”，KEGG则显著富集Calcium、IL-17、TNF、FoxO与Wnt通路，与网络药理学结果互为验证，共同锁定FoxO信号轴为后续机制研究突破口。Western blot验证发现，模型组肾组织磷酸化JNK（p-JNK）与核FoxO1显著升高，总FoxO1及磷酸化FoxO1（p-FoxO1，胞浆滞留形式）降低，GPX4下调；SQQS则剂量依赖地逆转上述变化，提示其通过抑制JNK磷酸化→减少FoxO1核转位→提升GPX4转录与翻译，最终阻断铁死亡。该发现首次把“JNK/FoxO1/GPX4”轴纳入MN治疗版图，为解释SQQS远期疗效提供了全新视角。图7 SQQS通过调控JNK/FoxO1/GPX4信号通路抑制PHN大鼠的铁死亡 为排除血流动力学与免疫干扰，研究建立RSL3（GPX4抑制剂）诱导的足细胞铁死亡模型。CCK-8显示，0.18 μM RSL3使细胞活力下降约50%，而0.1–0.5% SQQS含药血清（SQQSCS）可剂量依赖地恢复活力并改善线粒体嵴断裂；同时synaptopodin、nephrin、WT-1、α-actinin-4下调与desmin上调均被显著纠正，表明SQQS对足细胞的保护作用在“单纯铁死亡”条件下依旧成立。图8 SQQS在体外减轻GPX4缺失介导的足细胞损伤SQQS通过调控JNK/FoxO1/GPX4信号通路抑制足细胞铁死亡 在RSL3模型中，SQQSCS同样抑制p-JNK、减少核FoxO1、增加总FoxO1与p-FoxO1，同时提升GPX4与xCT、降低ACSL4；ROS、脂质过氧化（C11-BODIPY）、铁沉积（FerroOrange）及线粒体膜电位（JC-1）损伤均同步改善，进一步确认该轴在足细胞层面的普适性。图9 SQQS通过调控JNK/FoxO1/GPX4信号通路抑制足细胞铁死亡 研究者使用FoxO1特异性抑制剂AS1842856发现，抑制FoxO1核转位可协同SQQSCS进一步升高GPX4、降低ACSL4与ROS水平，提示FoxO1核定位是负向调控GPX4的关键步骤，而SQQS的干预靶点正是阻断FoxO1入核。图10 SQQS促进GPX4表达与FoxO1的核转位相关使用JNK激动剂Anisomycin与抑制剂Cucurbitacin IIb证实，激活JNK可加剧FoxO1核转位、抑制GPX4并放大铁死亡表型；抑制JNK则产生相反效应，且与SQQSCS联用后协同显著。该结果明确JNK为FoxO1上游“开关”，亦说明SQQS通过抑制JNK磷酸化实现对FoxO1核穿梭的精准钳制。图11 SQQS通过JNK磷酸化调控FoxO1的核转位 最后，研究对体内暴露的41个共同成分进行分子对接与100 ns分子动力学模拟，发现黄芩苷（baicalein）与芍药苷（paeoniflorin）对JNK1结合能最低、RMSF波动最稳定；SPR测定Kd值分别为398.97 nM与31.06 nM，证实二者为JNK1高亲和力配体。细胞功能验证显示，两药均可独立提升足细胞活力、恢复synaptopodin等蛋白表达、上调GPX4/xCT并抑制ACSL4，与SQQSCS总体效应高度一致。鉴于黄芩苷来源于方中“君药”黄芪，芍药苷来自“臣药”赤芍，提示二成分可能构成SQQS治疗MN的“核心-协同”药效单元，为后续组分中药开发及质量控制提供了可量化标志物。图12 黄芩苷与芍药苷通过靶向JNK1激活GPX4表达该研究以“临床有效-化学可视-机制清晰-靶点明确”四部曲，完成了SQQS从经验方到科学证据的华丽蜕变：一方面，用铁死亡这一全球肾病研究新热点重新诠释“益气活血、利湿泄浊”的科学内涵；另一方面，锁定JNK/FoxO1/GPX4轴并明确黄芩苷、芍药苷为关键物质基础，为复方中药“降维”到组分新药开辟快车道。未来，围绕该轴的临床生物标志物、ChIP-seq验证FoxO1-GPX4直接调控关系以及两项多中心随机对照试验（NCT058XXXXX）正在推进，有望为MN患者提供安全、精准、可负担的中医解决方案，也为世界肾脏病学贡献中国智慧。Li H, Sun Y, Yang J, Wang S, Xiao L, Wu Y, Chen X, Liang W, Chen W, Li P, Wang R, Zhao D, Zhao T, Qian Z, Bao K, Liu B. Sanqi Qushi formula alleviates podocyte damage in passive Heymann Nephritis rats by inhibiting GPX4 deficiency-mediated ferroptosis via the JNK/FoxO1 signaling pathway. Phytomedicine. 2025 Nov 9;150:157507. doi: 10.1016/j.phymed.2025.157507. Epub ahead of print. PMID: 41365194. #artContent h1{font-size:16px;font-weight: 400;}#artContent p img{float:none !important;}#artContent table{width:100% !important;}
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